(Citometria de fluxo, FCM) é um analisador de células que mede a intensidade da fluorescência dos marcadores de células coradas. É uma tecnologia de alta tecnologia desenvolvida com base na análise e classificação de células únicas. Pode medir rapidamente e classificar o tamanho, estrutura interna, DNA, RNA, proteínas, antígenos e outras propriedades físicas ou químicas das células, e pode ser baseado na coleta dessas classificações.
O citômetro de fluxo consiste principalmente nas cinco partes a seguir:
1 câmara de fluxo e sistema de fluidos
2 fonte de luz a laser e sistema de modelagem de feixe
3 sistema óptico
4 Sistema de eletrônicos, armazenamento, exibição e análise
5 sistema de classificação de células
Entre eles, a excitação a laser na fonte de luz a laser e no sistema de formação de feixe é a principal medição dos sinais de fluorescência na citometria de fluxo. A intensidade da luz de excitação e o tempo de exposição estão relacionados à intensidade do sinal de fluorescência. O laser é uma fonte de luz coerente que pode fornecer uma iluminação de comprimento de onda, alta intensidade e alta estabilidade. É a fonte de luz de excitação ideal para atender a esses requisitos.
Existem duas lentes cilíndricas entre a fonte do laser e a câmara de fluxo. Essas lentes concentram um feixe de laser com uma seção transversal circular emitida da fonte do laser em um feixe elíptico com uma seção transversal menor (22 μm × 66 μm). A energia do laser dentro deste feixe elíptico é distribuída de acordo com uma distribuição normal, garantindo intensidade consistente de iluminação para células que passam pela área de detecção do laser. Por outro lado, o sistema óptico consiste em vários conjuntos de lentes, furos e filtros, que podem ser divididos aproximadamente em dois grupos: a montante e a jusante da câmara de fluxo.
O sistema óptico em frente à câmara de fluxo consiste em uma lente e orifício. A principal função da lente e do orifício (geralmente duas lentes e um orifício) é focar o feixe de laser com uma seção transversal circular emitida pela fonte do laser em um feixe elíptico com uma seção transversal menor. Isso distribui a energia do laser de acordo com uma distribuição normal, garantindo intensidade consistente de iluminação para células na área de detecção do laser e minimizando a interferência da luz perdida.
Existem três tipos principais de filtros:
1: Filtro de passagem longa (LPF) - permite apenas a luz com comprimentos de onda maiores que um valor específico para passar.
2: filtro passa -curta (SPF) - permite apenas luz com comprimentos de onda abaixo de um valor específico para passar.
3: Filtro de pasta de banda (BPF) - permite apenas a luz em uma faixa de comprimento de onda específica.
Diferentes combinações de filtros podem direcionar sinais de fluorescência em diferentes comprimentos de onda para tubos de fotomultiplieiros individuais (PMTs). Por exemplo, os filtros para detectar fluorescência verde (FITC) na frente do PMT são LPF550 e BPF525. Os filtros usados para detectar fluorescência vermelha laranja (PE) em frente ao PMT são LPF600 e BPF575. Os filtros para detectar fluorescência vermelha (CY5) em frente ao PMT são LPF650 e BPF675.
A citometria de fluxo é usada principalmente para classificação de células. Com o avanço da tecnologia da computação, o desenvolvimento da imunologia e a invenção da tecnologia de anticorpos monoclonais, suas aplicações em biologia, medicina, farmácia e outros campos estão se tornando cada vez mais difundidas. Essas aplicações incluem análise de dinâmica celular, apoptose celular, digitação de células, diagnóstico de tumor, análise de eficácia de drogas etc.
Tempo de postagem: 21-2023 de setembro
