(Citometria de fluxo, FCM) é um analisador celular que mede a intensidade de fluorescência de marcadores celulares corados. É uma tecnologia de alta tecnologia desenvolvida com base na análise e classificação de células individuais. Ele pode medir e classificar rapidamente o tamanho, a estrutura interna, o DNA, o RNA, as proteínas, os antígenos e outras propriedades físicas ou químicas das células, e pode ser baseado na coleta dessas classificações.
O citômetro de fluxo consiste principalmente nas seguintes cinco partes:
1 Câmara de fluxo e sistema fluídico
2 Fonte de luz laser e sistema de modelagem de feixe
3 Sistema óptico
4 Sistema eletrônico, de armazenamento, de exibição e de análise
5 Sistema de classificação de células
Entre eles, a excitação a laser na fonte de luz laser e no sistema de formação de feixe é a principal medida de sinais de fluorescência em citometria de fluxo. A intensidade da luz de excitação e o tempo de exposição estão relacionados à intensidade do sinal de fluorescência. O laser é uma fonte de luz coerente que pode fornecer iluminação de comprimento de onda único, alta intensidade e alta estabilidade. É a fonte de luz de excitação ideal para atender a esses requisitos.
Existem duas lentes cilíndricas entre a fonte de laser e a câmara de fluxo. Essas lentes focam um feixe de laser com seção transversal circular emitido pela fonte de laser em um feixe elíptico com seção transversal menor (22 μm × 66 μm). A energia do laser dentro desse feixe elíptico é distribuída de acordo com uma distribuição normal, garantindo uma intensidade de iluminação consistente para as células que passam pela área de detecção do laser. Por outro lado, o sistema óptico consiste em múltiplos conjuntos de lentes, orifícios e filtros, que podem ser divididos em dois grupos: a montante e a jusante da câmara de fluxo.
O sistema óptico na frente da câmara de fluxo consiste em uma lente e um orifício. A principal função da lente e do orifício (geralmente duas lentes e um orifício) é focalizar o feixe de laser com seção transversal circular emitido pela fonte de laser em um feixe elíptico com seção transversal menor. Isso distribui a energia do laser de acordo com uma distribuição normal, garantindo uma intensidade de iluminação consistente para as células em toda a área de detecção do laser e minimizando a interferência da luz difusa.
Existem três tipos principais de filtros:
1: Filtro passa-longa (LPF) - permite a passagem somente de luz com comprimentos de onda maiores que um valor específico.
2: Filtro passa-curta (FPS) - permite a passagem somente de luz com comprimentos de onda abaixo de um valor específico.
3: Filtro passa-banda (BPF) - permite a passagem somente de luz em uma faixa de comprimento de onda específica.
Diferentes combinações de filtros podem direcionar sinais de fluorescência em diferentes comprimentos de onda para tubos fotomultiplicadores (PMTs) individuais. Por exemplo, os filtros para detecção de fluorescência verde (FITC) na frente do PMT são o LPF550 e o BPF525. Os filtros usados para detectar fluorescência vermelho-alaranjada (PE) na frente do PMT são o LPF600 e o BPF575. Os filtros para detecção de fluorescência vermelha (CY5) na frente do PMT são o LPF650 e o BPF675.
A citometria de fluxo é usada principalmente para triagem celular. Com o avanço da tecnologia computacional, o desenvolvimento da imunologia e a invenção da tecnologia de anticorpos monoclonais, suas aplicações em biologia, medicina, farmácia e outras áreas estão se tornando cada vez mais difundidas. Essas aplicações incluem análise de dinâmica celular, apoptose celular, tipagem celular, diagnóstico de tumores, análise de eficácia de medicamentos, etc.
Horário da publicação: 21/09/2023
